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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BK-P64714
  • 價(jià)格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2021-01-17
  • 更新日期: 2025-05-09
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BK-P64714
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號
是否進(jìn)口

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒

50

BK-P64714

實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix
2mM 
4 μl     
引物110pM 
2 μl     
引物210pM 
2 μl     Taq
酶 (2U/μl 
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl 
1 μl     
ddH2O 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
③RNA
沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA
清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA
干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1
、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2
、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3
、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4
、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,32。
3.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6.
換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

HOB Pellet 人成骨細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHCPEC NAZ-Glu-OHN-BOC-L-谷酸25BR98%

CL-0010786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鉍試劑Ⅰ 1,3,4-Thiadiazole-2,5-dithiol,98% 1072-71-5 5G 通用試劑

IFNG Others Human 人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 草甘膦 Glyphosctq 1071-83-6

肝細(xì)胞生長添加物HGSDTT(DL-DITHIOTHREITOL)二硫蘇糖醇蛋白組學(xué)級白色結(jié)晶粉末FROZENsigma

牦牛皮膚細(xì)胞;BMU-S1 單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞,J774A1細(xì)胞 Raji(Butt's 瘤細(xì)胞)105-75-9反二酸二丁酯Dibutyl fumarate
表皮角質(zhì)細(xì)胞總RNAHEK NAO-叔丁基-L-蘇氨酸O-tert-Butyl-L-threonine質(zhì)量規(guī)格:98%,BR

ITGA5 & ITGB1 Others Human  ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-乙酰-D-色氨酸N-Acetyl-D-tryptophan 質(zhì)量規(guī)格:0.98

KYSE30 細(xì)胞D-酪氨酸甲酯鹽酸鹽H-D-Tyr-OMe·HCl質(zhì)量規(guī)格:0.99

CL-0320BC3H1(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×22'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷2'-O-Methyladenosine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元D-纈氨酸D-Valine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B6?;萧斔咎?span>-b-D-葡萄糖苷酸Montelukast acyl-b-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

CD59A Others Mouse 小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 孟魯司特Montelukast Ether質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

C26瘤 孟魯司特亞砜(非對映)Montelukast Sulfoxide(Mixture of Diastereomers)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

THLE-3肝永生化細(xì)胞 THLE-3 human liver immortalized cell MD 21793BEGM培養(yǎng)基(目錄號CC3170)二氫孟魯司特鈉鹽Dihydro Montelukast  Salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

INHBB Protein Human 重組 Inhibin beta B / INHBB / Activin B 蛋白 (His 標(biāo)簽)25-羥基孟魯司特25-Hydroxy Montelukast質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
CL-0382MDA-MB-415(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2丹酚酸B(標(biāo)準(zhǔn)品)Salvianolic acid B質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL丹酚酸C(標(biāo)準(zhǔn)品)Salvianolic acid C質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

EAC 小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞丹酚酸D(標(biāo)準(zhǔn)品)Salvianolic acid D質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

IL17F Others Human 人 IL-17F / Ierleukin-17F 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (標(biāo)準(zhǔn)品)Cholesterol質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人晶體上皮細(xì)胞永生系;SRA01/04(HLE)Cholesterol質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1
RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2
)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3
)客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
4
)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCRquantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNARNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

聯(lián)系方式
手機(jī):13564080845
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