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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：人病毒1型群PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO，英文名或英文縮寫：Gallium，級(jí)別：CP，98%，規(guī)格：25毫升

FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-基苯 2-Cyanobenzoic acid,88% 3839-22-3 1G 通用試劑

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元芳樟醇;里那醇;沉香醇;芫荽醇;沉香萜醇;伽羅;胡荽醇;3,7-二基-1,6-忻二1-3-醇 Linclool;3,7-DiMqthyl-1,6-octcdiqn-3-ol;2,6-DiMqthyl-2,7-octcdiqn-6-ol 78-70-6

INSL4 Others Human 人 INSL4 / EPIL 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Q瓊脂糖凝膠FF1克

人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1139-13-9氮基三乙酸nitnilotriacetic acid
TNFRSF6B Others Human 人 DCR3 / TNFRSF6B 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 芍藥內(nèi)酯苷(標(biāo)準(zhǔn)品）Alibiflorin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96.50%，標(biāo)準(zhǔn)品

氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)蛇床子素（標(biāo)準(zhǔn)品）Osthole質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

蚊源細(xì)胞 人腺癌細(xì)胞，SW620[SW-620]細(xì)胞 HCC 94 [HCC941122](子宮鱗癌細(xì)胞(高分化))蛇床子素Osthole質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR

人胃腺癌細(xì)胞;BGC-823麝香酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Muscone質(zhì)量規(guī)格：GC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

PVR Others Human 人 CD155 / PVR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Cimigenol-3-O-β-D-xylpyranoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
人病毒1型群PCR檢測(cè)試劑盒說明書PDCD1 Others Rat 大鼠 PD1 / PDCD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 色素(醇溶）Nigrosin alcohol soluble質(zhì)量規(guī)格：BS

人紅系細(xì)胞;TF-17-羥基;傘形花內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）7-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：GC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

雜交瘤(B類);C3110D2B2 細(xì)胞，DU145細(xì)胞 H4-ⅡE細(xì)胞，大鼠細(xì)胞6,7,8,9脫氫帕潘立酮鹽酸鹽6,7,8,9 Dehydro Paliperidone Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

WM451, 人色素瘤細(xì)胞 HumanN-氧基帕潘立酮Paliperidone N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

HA Others H5N2 甲型 H5N2 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 帕潘立酮-d4Paliperidone-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0910拓?fù)涮婵掉人徕c鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Topotecan Carboxylic Acid  Salt

大鼠氣管上皮細(xì)胞;RTE 慢性髓原細(xì)胞，K-562細(xì)胞 P3X63Ag8.653細(xì)胞，小鼠細(xì)胞拓?fù)涮婵蒂|(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Topotecan

ACHN, 人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 Human15-酮基氟前列醇異丙酯質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口15-keto Fluprostenol isopropyl ester

CRTAM Others Human 人 CRTAM 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 曲唑酮鹽酸鹽-d6質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Trazodone-d6 Hydrochloride

上皮細(xì)胞培養(yǎng)基MEpiCMN-去甲基米非司酮質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N-Demethyl Mifepristone
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。